光度計是一種實用性較強且測試準確的光學分析儀器,在平時測試過程原理當中需要用到例如UV法來實現一些光度上的測量。光度計的UV法是在280nm波長,直接測試蛋白與測試核酸類似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,*的線性范圍在1.0-1.5 之間。實驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時,發現讀數“漂移”。這是一個正常的現象。事實上,只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%,表明結果非常穩定。
選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除320nm 的“背景”信息,設定此功能“開”。
漂移的原因是因為Warburg 公式吸光值換算成濃度,乘以一定的系數,只要吸光值有少許改變,濃度就會被放大,從而顯得結果很不穩定。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。對于紫外線來說可以之間定量法相對于比色法來說速度會更加快,操作也較為簡便,可以更加容易受到平行物質的干擾,例如DNA的干擾就是其中之一,此外敏感度也是一方面因素,要求上來說蛋白的濃度會高一些,所以光度計的UV法是一種光度計中*的一個物理學技術。
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